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   Voz: Tara Strong en Estados Unidos. Yolanda Gispert en España. Carla Castañeda (Carolina Ayala en los episodios 14 a 21) en Hispanoamérica.
   Canto: Rebecca Shoichet en Estados Unidos.
Es una poni unicornio, color violeta, dotada de una magia poderosa. Antes del primer episodio,
Twilight Sparkle ID S4E01.png
realizaba sus estudios en una amplia biblioteca como alumna de la princesa Celestia, de tal modo que huía de situaciones que la obligaran a socializar con otros ponis. Sin embargo, tras ser enviada a Ponyville, descubre la alegría de la amistad. Twilight establece una estrecha amistad con las otras cinco ponis, en el episodio final de la tercera temporada Magical Mystery Cure Twilight completa un hechizo antiguo incompleto cumpliendo su destino volviéndose una Alicornio cambiando su nombre a Princesa Twilight Sparkle. Su mascota es un búho llamado Owlowiscious que la ayuda en algunas de las funciones de Spike cuando este está dormido. Twilight Sparkle representa el elemento de la magia.

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